Técnicas Histológicas y MicroscopiaPreparación del Tejido.

1º Paso: Obtención de la muestra:

• Biopsia; tejido vivo.

• Autopsia; tejido muerto.

• Necropsia; tejido podrido - necrosado.

2º Paso: Fijación:

• En general obtenida mediante el empleo de sustancias químicas individuales o mezclasde estas;

• El fijador de uso más común es la formalina (solución acuosa de formaldehido al 37%)

• Este fijador no reacciona con los lípidos, por lo tanto es un mal fijador de lasmembranas

3º Paso: Deshidratación:

• Luego después de la fijación, se lava y deshidrata la muestra en una serie de solucionesalcohólicas de concentración creciente hasta llegar al 100%

• Después de eso, se utilizan solventes como el xileno o tolueno para extraer el alcohol al100%.

4º Paso: Inclusión:

• Incluir la muestra en la parafina fundida a 60 grados.

• Luego después que la parafina se ha enfriado y endurecido se obterá un bloquedenominado taco.

• Coloca-se el taco en una maquina denominada micrótomo, que se encargará de hacercortes de 5 a 15 µm (micras) (1 micra equivale a milésima parte de 1 milímetro).

5º Paso: Coloración:

• Después de los cortes hay que hidratar la muestra con una serie de solucionesalcohólicas en porción decreciente para que se pueda colorear con hematoxilina (colorazul) y después otra vez deshidratar con una serie de soluciones alcohólicas en porcióncreciente para que se pueda colorear con eosina (color rosa).

 

Microscopia.

Microscopia Óptica.

• Microscopio de campo claro: es actualmente el microscopio más utilizado por losestudiantes, ello es el microscopio descendente de los utilizados en el siglo XIX. Suscomponentes son los siguientes:

o Fuente luminosa;o Condensador.

o Platina.

o Objetivo.

o Ocular.

Las muestras a seren observadas en ese tipo de microscopio tiene que ser extremamentefinas, para que la luz pase a través de ella, y coloreadas con eosina y hematoxilina. Sin esespré-requisitos la muestra no se produce grado de contraste suficiente para estudio.

• Microscopio de campo escuro: en ese tipo de microscopio, la lente objetiva no capta luzdirecta proveniente de la fuente luminosa. El está provisto de un condensador especial queelimina el preparado con mucha intensidad y en forma muy oblicua. Solamente los rayos deluz refractados por las estructuras de la muestra penetran la lente objetiva. La resolución delmicroscopio de campo escuro no es mejor que la de campo claro, pero se puede detectarpartículas más pequeñas.

• Microscopio de fluorescencia: Aprovecha la capacidad algunas moléculas de florecer bajo laluz ultravioleta, como a vitamina A y algunos neurotransmisores. La función delmicroscopio de fluorescencia es estudiar la fluorescencia secundaria, que es detectarantígenos o anticuerpos en las técnicas de inmunocitoquimica.

• Microscopio confocal de barrido: combina componentes de un microscopio de campo clarocon un sistema de barrido para disecar ópticamente una muestra. Fuiste desarrollado paraestudiar la estructura de materiales biológicos. Poseí un sistema de iluminación a laser queproduce un punto de barrido muy superficial.

• Microscopio de luz ultravioleta: La imagen en este tipo de microscopio depende de laabsorción de la luz UV por las moléculas de la muestra. La muestra no puede inspeccionar-se en forma directa a través del ocular porque la UV no es visible y lesiona el ojo, entonceslos resultados se registran en una placa fotográfica para q se pueda analizar-se.

• Microscopio de polarización: es una simple modificación del microscopio de campo claro enel cual un filtro de polarización se coloca entre la fuente de luz y la muestra, y un segundofiltro se coloca entre o objetivo del microscopio y el observador.

 

Microscopia Electrónica.

 

• Microscopio electrónico de transmisión (MET): utiliza la interacción de un haz de electronescon la muestra para producir una imagen.

• Microscopio electrónico de barrido (MEB): el haz de electrones no atraviesa la muestra sinoque explora su superficie.

• Microscopio electrónico de transmisión-barrido: combina características del MET y delMTB para permitir el microanálisis de rayos X por sonda electrónica